信帆生物銷(xiāo)售過(guò)氧化氫！

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測(cè)定意義：

H₂O₂是生物體內(nèi)常見(jiàn)的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生，由CAT和POD等催化降解。H₂O₂不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面，H₂O₂可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害，從而加速細(xì)胞的衰老和解體；另一方面H₂O₂也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，。

測(cè)定原理：

H₂O₂與硫酸鈦生成黃色的過(guò)氧化鈦復(fù)合物，在415nm有特征吸收。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮60mL、濃鹽酸10mL、研缽和冰。

試劑的組成和配制：

試劑一：丙酮100mL×1瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入3mL濃鹽酸充分溶解備用。用不完的試劑4℃保存；

試劑三：液體×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體×1瓶，4℃保存；

H₂O₂提取：

1、細(xì)菌或細(xì)胞樣品的制備：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 組織樣品的制備：稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1、由于試劑一易揮發(fā)，試劑一必須先預(yù)冷再加，研磨時(shí)必須在冰上研磨。

2、本試劑盒中試劑的揮發(fā)性較高，請(qǐng)帶一次性手套和口罩。

測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至415nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 將試劑二、三和四37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3. 在EP管中按順序加入下列試劑

4000g，常溫離心10min，棄上清，留沉淀

加入試劑四溶解沉淀后，室溫靜置5min，取200μL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或96孔板中測(cè)定415nm處吸光值。對(duì)照管只要做一次即可。計(jì)算ΔA＝A測(cè)定-A對(duì)照。

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